【摘要】目的：建立铁棒锤中双酯型生物碱快速、简便、专属性强测定的方法。方法：采用分光光度法，使用乌头碱为对照品。结果：回收率为98.3％，RSD为0.72％。结论：所建立的方法精密度高，重现性良好，结果准确可靠，可用于铁棒锤中的双酯型生物碱的测定。
【关键词】铁棒锤；双酯型生物碱；
[ABSTRACT] OBJECTIVE: To establish a rapid, simple, and specific method for the determination of diterpene alkaloids from Aconitum pendulum. METHODS: Spectrophotometry was used to determine the content of diterpene alkaloids from Aconitum pendulum. Aconitine was used as reference substance. RESULTS: The mean recovery rate was 98.3%, and the RSD was 0.72%. CONCLUSION: The established method is accurate, , which can be used to the determination of diterpene alkaloids from Aconitum pendulum.
[KEY WORDS] Aconitum pendulum; Diterpene alkaloids;
铁棒锤别名八百棒、铁牛七、雪上一枝蒿，毛茛科乌头属植物铁棒锤Aconitum szechenyianum Gay.和伏毛铁棒锤A. flavum Hand.-Mazz.，以块根入药。具有祛风止痛，散瘀止血，消肿拔毒等作用。
铁棒锤收载于2010年版药典一部附录Ⅲ中，为藏药成方制剂中常用药材，同时是具有藏药特色的药材代表，其同科属植物有附子、川乌等。该科属主要毒性存在于双酯型生物碱中，为有效的控制药材的质量，同时保证患者的用药安全，本文通过使用紫外分光光度法以乌头碱计控制了铁棒锤中双酯型生物碱的含量，从而控制了的质量。
1 仪器与试药
1.1 仪器
岛津UV-2450型紫外分光光度计；AUW220D型岛津电子分析天平；KQ-300B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；Rotavapor R-20型旋转蒸发仪（瑞士BUCHI公司）。
1.2 试药
乌头碱对照品（中国药品生物制品检定所），批号：110720-200410；铁棒锤药材（青海金诃藏药药业股份有限公司），批号分别为：120701、120702、120703。水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 对照品溶液的制备
精密称取乌头碱对照品适量，加无水乙醇溶解并稀释，制成每1ml无水乙醇溶液含乌头碱1.0mg的溶液。
2.2 标准溶液的制备
精密吸取对照品溶液0、1、2、3、4、5ml，分别置于25ml量瓶中，加无水乙醇使成5ml，加3.5mg/ml盐酸羟胺的60%乙醇液1ml、4mol/L的氢氧化钠溶液1ml，振摇，室温放置15min，加5mol/L的盐酸1ml、水15ml、9%三氯化铁溶液1ml，振摇，使生成的沉淀溶解，加水至刻度，放置30min即得
2.3 样品溶液的制备
取样品3g，精密称定，于250ml具塞的锥形瓶中，加三氯甲烷50ml、10%氨水2.5ml，超声提取1h。过滤，残渣用三氯甲烷洗涤3次，合并洗液与滤液，低温挥干溶剂，残渣用乙醚20ml溶解，用0.5mol/L的盐酸萃取3次，每次10ml。酸液用氨水调节PH至10以上，再用三氯甲烷萃取4次，每次15ml，回收溶剂至干，残渣用无水乙醇溶解并定容至10ml，摇匀，精密量取3ml于25ml的量瓶中，加无水乙醇2ml，按“2.2”所述操作，即得。
2.4 测定波长的选择
取“2.2”项下空白溶液、标准品溶液及“2.3”项下样品溶液于200-600nm处进行扫描，结果表明对照品溶液与供试品溶液在530nm处均有最大吸收，故确定530nm为检测波长。
2.5 标准曲线绘制
取“2.3”项下标准品溶液在530nm处照紫外分光光度法进行测定，以吸光度（A）对对照品浓度（C）进行线性回归，得回归方程A=0.0015C+0.0023，相关系数R=0.9991。
2.6 重现性试验
取铁棒锤药材样品6份，按总生物碱含量测定项下方法测定，计算总生物碱含量及其相对标准偏差。结果表明：平均含量为0.135%，RSD为0.69%，该方法重复性良好。
2.7 回收率试验
精密称取已知总生物碱含量的铁棒锤药材样品6份，分别精密加入乌头碱对照品，按总生物碱含量测定项下方法测定，计算回收率及其相对标准偏差。结果表明：该测定方法回收率为98.3％，RSD为0.72％，回收率良好。
2.8 测定与结果
取铁棒锤样品3批，按上法进行测定，结果如下表：
铁棒锤中双酯型生物碱测定结果
批号 含量(%)
120701 0.138
120702 0.167
120703 0.118
3 讨论
铁棒锤中主要活性为生物碱类成分，乌头碱、新乌头碱、次乌头碱等双酯型生物碱类成分为铁棒锤中重要的活性成分及毒性成分，现代药理已经证明具有镇痛、消炎、局麻等作用，在药材的的质量评价及毒性控制方面具有中药的意义。
乌头碱、新乌头碱、次乌头碱现代测定方法多以HPLC法进行分离测定，本文也曾采用药典中川乌的双酯型生物碱测定方法测定铁棒锤，但效果不理想。考虑双酯型生物碱绝非只有上述3种，本文通过植化的方法将双酯型生物碱进行富集，通过紫外分光光度法进行测定，通过方法学验证试验证明，该法简便、可靠、重复性高，可用于铁棒锤的质量控制。
参考文献：
[1]国家药典委员会编．中华人民共和国卫生部标准藏药第一册，1955；79,85.
[2]朱敏，肖培根．常用藏药榜嘎的研究[J]．中成药-1989,12（10）：17~19．
[3]张义智．唐古特乌头研究进展[J]．中国民族医药杂志-2012年1期：70~73．
[4]陈燕，易进海．HPLC法测定藏药药材铁棒锤、榜嘎中双酯型生物碱的含量[J]．世界科学技术-2009年第11卷第4期：570~573． |
